Центральная клинико-диагностическая лаборатория

ведущее место среди которых занимают: высокочувствительный тропонин  I, миоглобин и  NT-proBNP. (N-концевой фрагмент предшественника мозгового натийуретического петида). Высокоспецифичными маркерами риска развития сердечно-сосудистых заболеваний, которые определяются в нашей лаборатории, являются: гомоцистеин, высокочувствительный С-реактивный белок, липидный спектр и др.

Основные показания для определения тропонинов: диагностика инфаркта миокарда, оценка реперфузии после применения тромболитической терапии, выделение групп высокого риска среди больных острым коронарным синдромом без подъема сегмента ST, выделение больных, получающих наибольший эффект от низкомолекулярных гепаринов.

Уровень Тропонина I повышается у больных с нестабильной стенокардией при развитии микронекрозов. При стабильной стенокардии повышения уровня Тропонина I не отмечается.

В свою очередь миоглобин является цитозольным белком, поэтому, при разрушении клеток, он повышается в крови первым. При развитии осложнений инфаркта миокарда уровень миоглобина остается повышенным более 3х суток. Повторные повышения уровня миоглобина в крови на фоне уже начавшейся нормализации могут свидетельствовать о расширении зоны инфаркта миокарда или образовании новых некротических очагов.

Уровень мозгового натрийуретического пептида в крови существенно увеличен при нарушении функции сердца, почечной недостаточности, болезнях печени и у пациентов с различными формами вторичной гипертонии.  А поскольку повышенные уровни NT-proBNP появляются в плазме крови, раньше, чем становятся заметны клинико-инструментальные признаки дисфункции левого желудочка и застойной сердечной недостаточности, то  NT-proBNP практически незаменим для диагностики этой патологии на ранних стадиях, оказываясь чувствительнее эхоКГ.

По уровню  NT-proBNP можно четко определить степень развития застойной сердечной недостаточности по классификации NYHA (Нью-Йоркской кардиологической ассоциации).

Аутоиммунные заболевания  развиваются в тех случаях, когда в организме появляются антитела или клоны Т-клеток, направленные против собственных антигенов , которые способны разрушать клетки и ткани организма. Возникший  аутоимунный процесс – явление в значительной степени хроническое, приводящее к долговременному повреждению тканей. Связано это, в первую очередь, с тем, что аутоимунная реакция постоянно поддерживается тканевыми антигенами. В качестве аутоантиген могут выступать белки, нуклеиновые кислоты, фосфолипиды, полисахара, в том числе и сами иммуноглобулины.

Основными  скрининговыми методами лабораторной диагностики аутоимунных заболеваний являются: непрямая иммунофлуоресценция (НИФ): определение антинуклеарного фактора на клеточной линии HEp-2 с исследованием типа свечения ядра,позволяющая заподозрить патологию   и иммуноблот для раздельного выявления антинуклеарнх антител к следующим антигенам: Sm, RNP/Sm, SS-A (60 kДа), SS-A (52 кДа), SS-B, Scl-70, PM-Scl, PCNA, CENT-B, dsDNA/Histone/Nucleosome, Rib P, AMA-M2, Jo-1 антигену.
Кроме того для подтверждения и дифференциальной диагностики аутоимунных заболеваний  мы выполняем следующие тесты:

Скрининговыми тестами при подозрении на заболевание системы крови являются общий клинический анализ крови и,при необходимости, миелограмма.

Дополнительно могут быть выполнены такие исследования как:

По направлению лечащего врача для пациенты могут сдать кровь или костный мозг на все перечисленные виды исследований

Исследования выполняются методом ПЦР в режиме «реального времени» или фрагментного анализа.

Лаборатория выполняет спектр исследований, необходимый для подбора донора для трансплантации костного мозга, мониторинга степени приживления донорского трансплантата костного мозга и сердца.

Лаборатория регулярно успешно участвует во внешней оценке качества, проводимой европейской ассоциацией иммуногенетиков (EFI).

• Что такое гены HLA и почему они определяют приживление/неприживление трансплантата?

Главный комплекс генов гистосовместимости человека — HLA (human leukocyte antigen) — комплекс тесно сцепленных генетических локусов, а также их белковых продуктов, отвечающих за развитие иммунного ответа и синтез трансплантационных антигенов, что обуславливает распознавание и отторжение чужеродных тканей и органов.
Гены HLA расположены на коротком плече хромосомы 6 и подразделяются на 3 класса.

Регион класса I

Классические гены класса I — это HLA-A, HLA-B, HLA-C, которые кодируют гипервариабельные цепи молекул HLA-рецепторов, представленных на плазматической мембране всех ядерных клеток и тромбоцитов.

Регион класса II 

В его состав входит несколько локусов, таких как HLA-DR, HLA-DQ, HLA-DP, кодирующих вариабельные цепи молекул HLA-рецепторов,  представленных на плазматической мембране только иммунокомпетентных клеток.

HLA-DRB3/4/5-гены – дополнительные гены локуса HLA-DR, входящие в состав некоторых HLA-гаплотипов.

Гены класса III – располагаются между областями генов HLA классов I и II. Они кодируют молекулы врожденного иммунитета (компоненты комплемента, фактор некроза опухоли, белки теплового шока и др.). Данные гены не исследуют для определения степени совместимости донора и реципиента.

• Какие виды HLA-типирования выполняются в лаборатории Центра им. В. А. Алмазова?

HLA-типирование с низким (low) разрешением методом ПЦР-SSP (коды услуг A12.06.063.002-A12.06.063.009)  — результат типирования, полученный в результате полимеразной цепной реакции с сиквенс-специфическими праймерами на уровне первого поля согласно номенклатуре ВОЗ.

Достаточно типировать на низком разрешении по трем локусам (HLA-A*/B*/DRB1*), чтобы сделать вывод о совместимости донора и пациента, только в случае, если типируются родственные доноры, HLA-генотипы которых позволяют выявить 4 семейных HLA-гаплотипа (например: родители и ребенок, несколько сиблингов). Данное исследование выполняется 3-5 дней.

HLA-типирование с высоким (high) разрешением методом секвенирования (SBT) (коды услуг A12.06.063.013-A12.06.063.019) — идентификация аллелей, кодирующих одинаковую аминокислотную последовательность внутри антигенсвязывающего сайта методом полимеразной цепной реакции с последующим секвенированием по Сэнгеру. Высокое разрешение идентифицирует аллели на уровне первого и второго поля (четыре цифры) – например, А*01:01, А*26:02, согласно номенклатуре ВОЗ.

Типирование высоким разрешением по трем локусам (HLA-A*/B*/DRB1*) является минимально необходимым условием, чтобы сделать вывод о совместимости родственных доноров,  HLA-генотипы которых НЕ позволяют выявить 4 семейных HLA-гаплотипа (например: один родитель и ребенок, два сиблинга). В случае, если необходимо выполнить поиск неродственного донора в регистре, пациенту необходимо выполнить типирование высоким разрешением по пяти локусам (HLA-A*/B*/C*/DRB1*/DQB1*). Сроки выполнения данных исследований от 1-ой до 3-х недель.

• Что такое сенсибилизация к HLA?

Сенсибилизация к антигенам системы HLA говорит о наличие в организме антител к указанным антигенам. Антитела представляют собой иммуноглобулины классов М и G. Не являются естественными антителами организма и появляются после предшествующей иммунизации:

• Беременность
• Трансфузии
• Трансплантации

Данные антитела направлены на уничтожение чужеродных клеток, несущих комплементарные антигены HLA. Являются пусковым механизмом реакции отторжения и повреждения трансплантата.
Таким образом, цели выявления антител к антигенам HLA:

• Выбор оптимального донора
• Определение иммунологического риска отторжения
• Подтверждение диагноза отторжения
• Мониторинг десенсибилизирующей терапии

Первым этапом проводится определение предсуществующей сенсибилизации у пациента и у потенциального донора (код услуги A12.06.063). Данное исследования позволяет выявить антитела, дать их количественную характеристику и дифференцировать по классам. Срок выполнения данного исследование 1-5 дней.
Но, если необходима детальная информация о том, какие конкретно присутствуют антитела и есть ли среди них донор-специфические, выполняется второй этап — идентификация антител (коды услуг A12.06.063.20.001 и A12.06.063.20.002). Данное исследование количественно и качественно выявляет конкретные анти-HLA антитела, в том числе появляется возможность идентифицировать донор-специфические антитела, способные вызвать гиперострое отторжение трансплантата. Срок выполнения данного исследование 1-5 дней.

• Как определить степень приживления трансплантата?

Два случайно выбранных индивида отличаются друг от друга на 1 из 1000—1500 нуклеотидов, то есть ~0,1 – 0,2% генома (3 миллиона нуклеотидов) являются уникальными у каждого человека и могут использоваться для идентификации личности и определения химеризма после аллогенной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток (ТГСК).

Существует большое количество методов, позволяющих определять степень донорского химеризма. Мы используем метод фрагментного анализа STR-локусов (коды услуг A09.05.253.001-A09.05.253.002).
STR-локус — это участок ДНК с определенной геномной локализацией, содержащий тандемные повторы паттерна нуклеотидов, количество которых уникально для каждого индивида.
Исследование выполняется в два этапа — первый это скрининг (код услуги A09.05.253.001), где выявляются информативные STR-локусы, то есть те локусы, по которым донор и пациент отличаются, выполняется одновременно с первым мониторингом. Второй этап — мониторинг (код услуги A09.05.253.002), где делается вывод о процентном содержании донорских и реципиентских клеток в организме пациента. Данное исследование выполняется 3-5 дней.

Стандартное кариотипирование

Пренатальное кариотипирование

Постнатальное кариотипирование

Таблица описание FISH

Клинико-диагностическая лаборатория

Лаборатория микробиологии 

Экспресс-лаборатории ЦКДЛ ГКК

Экспресс-лаборатория